作业帮怎么提取RNA?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/29 06:33:43
怎么提取RNA?
怎么提取RNA?
怎么提取RNA?
我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了.
整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的（一般分子实验所用的都多多少少有毒.）,所以要小心~
RNA可溶于酒精
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一般使用TRIZOL法，各种公司如takara都可以买到，先组织匀浆或TRIZOL裂解细胞，加1/5 V/V氯仿摇均匀后12000rpm 4°离心，取上层水相，加入1/1 V/V异丙醇沉淀RNA， 然后75%酒精（DEPC水配制）洗涤，然后融于 DEPC水。可以RNA电泳和测浓度检测RNA浓度纯度。
或使用TRIZOL试剂盒，原理相似。
实验过程中要注意RNA酶污染，应在hood或...
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一般使用TRIZOL法，各种公司如takara都可以买到，先组织匀浆或TRIZOL裂解细胞，加1/5 V/V氯仿摇均匀后12000rpm 4°离心，取上层水相，加入1/1 V/V异丙醇沉淀RNA， 然后75%酒精（DEPC水配制）洗涤，然后融于 DEPC水。可以RNA电泳和测浓度检测RNA浓度纯度。
或使用TRIZOL试剂盒，原理相似。
实验过程中要注意RNA酶污染，应在hood或通风橱中进行，所有操作戴干净的手套。
TRIZOL和DEPC有剧毒，避免皮肤接触和吸入，垃圾应统一处理。
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这是我当时用过的方法，效果还不错：
取约5×106个细胞，经PBS洗涤后，加入800μL TRIzol，混合后室温放置5分钟，再加入196μL氯仿，振动15至30秒，室温放置2至3分钟，以4℃，12 000×g离心15分钟，小心将上层液体转移至新管中，加入500μL的异丙醇，轻弹使其混匀，室温放置20分钟，以4℃，12 000×g离心15分钟，此时RNA沉淀于管底形成胶状小球，弃掉上清，用...
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这是我当时用过的方法，效果还不错：
取约5×106个细胞，经PBS洗涤后，加入800μL TRIzol，混合后室温放置5分钟，再加入196μL氯仿，振动15至30秒，室温放置2至3分钟，以4℃，12 000×g离心15分钟，小心将上层液体转移至新管中，加入500μL的异丙醇，轻弹使其混匀，室温放置20分钟，以4℃，12 000×g离心15分钟，此时RNA沉淀于管底形成胶状小球，弃掉上清，用75%的乙醇清洗RNA沉淀，以4℃，8 000×g离心5分钟，弃掉上清，快速干燥RNA，加入30至50μL无RNA酶的水溶解RNA，用紫外分光光度计测量RNA浓度及OD260与OD280的比值。
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