his-tag 我的目的基因连在PET28载体上,设计引物时我把基因的终止密码子去掉,这样俩边的HIS-TAG都表达了,虽然HIS标签很小,不知这样会不会影响我的基因纯化,以及后续试验的基因功能?

his-tag 我的目的基因连在PET28载体上,设计引物时我把基因的终止密码子去掉,这样俩边的HIS-TAG都表达了,虽然HIS标签很小,不知这样会不会影响我的基因纯化,以及后续试验的基因功能? 融合蛋白 His标签问题我的目的基因片段在pET28a载体中是这样的一个情况 -----CATCATCATCATCATCAC（His-tag）-------14bp-------ATG(后面是我的目的基因片段)-------这样的话表达的蛋白会有His-tag吗? 怎样防止目的基因和载体的自连 青霉素抗性基因,切割后在DNA连接酶的作用下与载体连接产生3种连接产物,目的基因-目的基因连接物;目的基因-载体连接物;载体-载体连接物.将这些产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! 如何使目的基因连接到质粒载体上,目的基因怎么获得呢?如果我要一种细胞因子的基因,怎样才能得到呢?应该选择什么样的质粒载体呢? 用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑 如果我把目的基因连接到质粒载体上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么知道它用那个启动的呢 关于含目的基因受体的筛选的问题将切割后的质粒和目的基因片段混合,会出现三种情况：质粒自连,目的基因自连,质粒和目的基因连在一起,而利用质粒上的标记基因如四环素的抗性基因进行 限制行内切酶切割质粒和目的基因后,目的基因是怎么和质粒连接的?就是只有一种切割酶的时候,切完了以后目的基因和质粒是怎么连的?这个问题我不太懂.可能说的不是很清楚.额.就是类似于 我现在在构建表达载体,关于目的基因的获取,我想问问,目的基因是要从什么位置获取?是从转录起始点,还是从启动子区?就是说我的目的基因需不需要包括非编码区?我需要目的基因最终蛋白的 为什么用两种不同的限制酶切目的基因和运载体,就能防止运载体本身、基因本身连起来?我们老师说是因为DNA有极性,但是我画了个图,还是拼起来了 用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢? 影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素? 影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素? 目的基因能否在棉珠内稳定遗传的关键是什么? 如果质粒与目的基因结合的重组DNA和不含目的基因的质粒,同时在培养基中表达,怎样区分和筛选出目的基因? 标记基因为什么能检测含有目的基因的细胞?没插入目的基因的同样也能表达标记基因啊?（标记基因在插入目的基因时又没被破坏,）所以这怎么检测啊?