请教各位我设计引物加了酶切位点和六个保护碱基,结果扩出来的片段短了,缺少我之前设计引物那段互补片段请教各位我设计引物能扩增出目的片段,测序结果正确,设计表达引物直接在上面加

请教各位我设计引物加了酶切位点和六个保护碱基,结果扩出来的片段短了,缺少我之前设计引物那段互补片段请教各位我设计引物能扩增出目的片段,测序结果正确,设计表达引物直接在上面加 PCR时引物的概念包括加进去的酶切位点和保护碱基嘛?算进引物的长度吗?一块分析嘛?我设计的下游引物只有15个碱基,但primer5上的长度18个,如果我删去三个就不配对了（只是下游引物）,影响 设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么原则. 克隆设计引物插入酶切位点的问题我要对真菌的全序列进行克隆,设计引物时是不是讲酶切位点插入到5’端就可以了?加的保护基团在酶切位点之前加就可以吗,它是随便的三个碱基吗?限制性 【求助】请教：加HIS标签的引物如何设计 各位看看我的引物酶切位点和保护碱基有什么问题吗5’-CCTGAATTCATGGCTAGCCTTCTCA-3’5’-CCGCTCGAGTATTTA ATTGAATAGTT-3’ 引物加了保护碱基和酶切位点（共14个碱基）后退火温度需要调整吗? 引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?能帮我看下,这样设计的引物对吗ATGC TCTAGA GC TCAGATGTCCACGTCCCG前面四个和第11、12个（GC）是保护碱基,中间6 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, 有关PCR引物设计好像引物设计好以后,还要添加什么保护碱基,有时还要添加酶切位点,这些东西添加进去后,不是无法和模板链连接起来了吗?除非是把引物设计的所有要求统一起来,在模板链上 煎鱼是如何保护鱼皮?大家都知道,煎鱼时一不小心就会把鱼皮破坏.既影响了美观和口味.我加了一些盐,油温也调低了,但还是效果不好.请教各位高人,谢谢! PCR引物设计不好,如何提高引物特异性?设计的PCR引物都是80多分的样子,但是一旦加上酶切位点和保护碱基以后,引物的特异性就变得特别差,如何解决这种问题,有没有什么设计引物的技巧呢? 用pp5设计引物,扩增内含子,是不是将上游引物和下游引物设计在外显子上就可以了? 我自己用primer5.0和oligo6.0引物设计软件,设计了一对特异性引物老是有非特异性条带 PCR引物设计问题我是要扩增一个片段,加上双酶切位点,片段就那么大,我就需要那么大加酶切位点?这引物怎么设计?是不是只要5‘端序列,以及3’端的反向互补序列加上酶切位点和保护碱基就 反转录特异引物的选择小白提问,求师哥师姐帮忙： 我提取了昆虫的RNA ,反转录过程中用的是自己设计的特异引物,请问 F和R（引物）都要加吗?还是只加一个就可以.谢谢 引物的设计原则引物设计原则和具体步骤!原理! 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加