我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都P出来了现在加入两端的引物,就是扩不出来1000的条带,这20重叠有13个是CG对,我不知道是不是退火温度的

我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都P出来了现在加入两端的引物,就是扩不出来1000的条带,这20重叠有13个是CG对,我不知道是不是退火温度的 对于一段有重复序列的片段如何扩增,只是一个基因的中间的部分序列,准备扩增做overlap.我在两端设计的无配对引物,无法扩增目的条带,不知对PCR 条件有什么要求? 请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段. 什么叫overlap PCR 什么是overlap extension pcr 最近在做实验RT-PCR,我做RT-PCR,一对引物Tm值分别是52.2,54.6.目的片段1062,PCR反应条件怎么设置呀 两个PCR片段的overlap 我现在需要将片段1(1900bp)和片段2(1800bp)连接起来.片段1的上下游引物分别为1a,1b.片段2的上下游引物分别为2a,2b.1b 和2a是反向互补的,约22个碱基,现在我已分别通过1a-1b,2a-2b扩 什么原因会导致overlap PCR拼不出? 谁可以简单罗列下做OVERLAP PCR的要点吗?最好图解原理 以及引物设计时候注意事项 大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的 realtime PCR 做实时荧光PCR,就用染料的那种,是不是有要求PCR的片段,一般在100BP左右?realtime PCR1.做实时荧光PCR,就用染料的那种,是不是有要求PCR的片段,一般在100BP左右?2.坐标线是否是用克隆的方 PCR试剂盒问题各位大虾好,我是一名菜鸟,最近遇到一个问题,我需要扩增一个长度为2500左右的DNA片段,该片段连在质粒上,我想订Takara公司的PCR试剂盒,但是不知道应该订哪一种,有哪位高士能指 请问做PCR时是否有一些措施或机制可以防止或者减少扩增过程中的DNA突变率?PCR扩增出来的片段和在生物体内自己复制的DNA片段,哪个突变率更大? PCR 我P的是两个基因 前两个样品的目的片段是612bp 后两个是672bp 请问P出来了吗? 实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发,用的是ABI 7500我做实时荧光定量PCR,有两个问题要解决：1.PCR之后发现反应体系减少了,可能是因为蒸发了,但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了,为什么还会减少. Solidworks Simulation里面如何实现两个零件的接触连接?我用solidworks做了一个牙齿和牙床,需要让牙齿固定在牙床上进行受力分析,但是simulation里面貌似没有ansys中的Glue,overlap等功能,要怎么实现?望 我的taq酶进行梯度pcr为什么没有结果?引物和模板都没有问题,用la TAQ都能p出来目的片段由于要进行菌落pcr,la taq太贵了,所以需要使用普通taq进行.同一批次的引物在两个月之前还可以p出目的片 PCR琼脂糖凝胶电泳后发现核酸向负极方向反着跑到胶的头部了,怎么回事?我研究的方向是分子生物学,这几天一直在做细菌核酸提取及16SrDNA通用片段常规PCR检测,提取核酸方法是用水煮法,可每